免费发活动

Strep-tag® 系统

时间 :2018-05-18 来源:百购生物网

大家也许已经知道了 Strep-tag® 系统的发展由来,本文将对 Strep-tag® 系统的使用方式及应用范围做进一步阐述,并与常用的 His-tag 系统进行对比。

纯化步骤更精简

Strep-tag® 系统纯化流程精简,省去测试不同条件的时间

在所有缓冲液都已准备好的情况下,His-tag 与 Strep-tag® 系统皆为一步纯化。但不同于 Strep-tag® 的是,使用 His-tag 系统时,常需额外先对纯化不同目的蛋白所需的咪唑 (Imidazole) 溶液浓度及含盐量进行测试。下表为两个系统的标准纯化步骤:
纯化流程 第三代 Strep-tag® 系统 His-tag 系统
平衡柱子 2 CV Buffer W
成分
100 mM Tris/HCl pH8.0;
150 mM NaCl;
1 mM EDTA;
2 CV Ni-NTA Lysis Buffer
成分
50 mM NaH2PO4
300 mM NaCl;
10 mM imidazole,依结合状态调整;
Adjust pH to 8.0;
加入蛋白提取液 在上样前,为移除可能产生的沉淀物,冻存的细胞提取液需先离心一次(18.000 xg,5 min,4°C)
冲洗纯化柱 5x 1 CV Buffer W 2x 4 CV Ni-NTA Wash Buffer
成分
50 mM NaH2PO4
300 mM NaCl;
20 mM imidazole;
Adjust pH to 8.0;
洗脱蛋白 6 x 0.5 CV Buffer BXT
成分
Buffer W;
100 mM biotin;
4 x 0.5 CV Ni-NTA Elution Buffer
成分
50 mM NaH2PO4
300 mM NaCl;
250 mM imidazole;
Adjust pH to 8.0;
再生/保存柱子 4 CV 10 mM NaOH
8 CV Buffer W
0.5 M NaOH for 30 mins
30% EtOH
* His-tag 系统:参考生产商 batch 纯化流程
另外值得一提的是,Strep-tag® 系统能与许多表面活性剂,还原剂与螯合剂兼容,是一个非常有弹性的系统。若目的蛋白为金属蛋白或膜蛋白,也可以将缓冲液中的 EDTA 去除,并且不会影响 Strep-Tactin®XT 的表现,可见右表整理。
更详细的相关试剂表请见 >>
试剂 耐受浓度(测量值,不代表最高值)
DTT 45 mM
β-Mercaptoetanol 45 mM
EDTA 50 mM
Imidazole 250 mM
NaCl 4.5 M
Urea 6 M

纯化结果较高低

由上表可知,Strep-tag® 系统的纯化流程简便,但表现不打折扣,下图测试了几个不同的蛋白在天然状态下的纯化,纯度皆在 95% 以上。除此之外,在变性条件中纯化目的蛋白亦没问题,纯度仍远高于使用 His-tag 系统。

在 native 条件下,纯化 mCherry 及 GAPDH 蛋白的表现


第三代 Strep-tag® 系统(左)与 His-tag 系统(右)
以 SDS-PAGE 分析发现,不管是 mCherry 或是 GAPDH,使用 Strep-tactin® XT : Twin-Strep-tag® 都能得到纯度较高的目标蛋白 (见 Elution)。Western Blot 分析结果显示,提取 mCherry 所出现的杂质为其降解产物。

在变性条件下,纯化不同蛋白的效果


His-tag 系统(左)与第二、三代 Strep-tag® 系统(中、右)
以 SDS-PAGE 分析发现,使用第三代 Strep-tactin® XT 能在使用 6M 尿素的变性条件中,得出大量高纯度的蛋白;相对而言,使用 Strep-tactin® 仅能得到极少量蛋白。而使用 Ni-NTA 虽然能在将 pH 值调降至 4.5(E2) 情况下,提取靶蛋白,但得到的最终产物仍含有许多杂质。

适用范围选择多

蛋白类型

因 His-tag 系统使用 Ni 离子,所以在纯化金属蛋白 (多数为酶) 时,可能会受到金属间交互作用的干扰,而使用 Strep-tag® 则不会出现此问题,因 Strep-Tactin® XT 与 Strep-tag® 的特异性结合不受金属离子影响。且因其温和的纯化流程,所以还能用于纯化大型蛋白、多亚基的蛋白复合体或是跨膜蛋白,并且保持蛋白功能。以 Strep-tag® 系统纯化出不同的蛋白,下图为例:
 

宿主细胞类型

依据研究项目的不同,各实验室使用不同的表达系统,最常用的有大肠杆菌、哺乳动物细胞、酵母、昆虫细胞或是植物细胞等。但若使用哺乳动物细胞来表达目的蛋白,His-tag 则不适宜,因为系统中的组氨酸会干扰其纯化表现,其他的生产商也不建议这样的使用方式 。而 Strep-tag® 系统则与这些表达系统都能互相搭配,见下图实验数据:
 
* 单一条带为纯化出来的目标蛋白
除了用来生产高纯度的蛋白,Strep-Tactin® XT 与 Twin-Strep-tag® 间的高亲和力更能利用来稳定的固定目标蛋白,以进行蛋白质检测,例如 SPR 分析。以往为了增进目标蛋白的纯度,或进行下游分析,常常研究一个蛋白需要使用好几个不同的标签。现在有了 Strep-tag® 这个多功能的亲和标签系统,让您的蛋白研究从克隆到分析一次到位。

好礼相送

心动了吗?即日起到 6 月 15 日止,凡购买 Strep-Tactin® XT 系列纯化/蛋白固定产品(点此询价),您就可免费获得以下小礼物(二选一):
基本 Buffer 组,内含: 蛋白检测组,内含:
1x Buffer W, 120 ml Strep-Tactin®-HRP conjugate, 20 μg
1x Buffer BXT, 25 ml Control protein GFP-Strep-tag, 30 μg
附:Strep-Tactin® XT 系列产品
Format Size Cat.no.
Strep-Tactin® XT Superflow® 50 % suspension 4 ml;
20 ml;
50 ml;
2-4030-002;
2-4030-010;
2-4030-025;
Strep-Tactin® XT Superflow® gravity flow columns 5×0.2 ml;
1 ml;
5 ml;
10 ml;
2-4031-005;
2-4032-001;
2-4033-001;
2-4034-001;
Strep-Tactin® XT Superflow® cartridges (for Äkta/peristaltic pumps) 1 ml;
5 ml;
2-4025-001;
2-4026-001;
Strep-Tactin® XT Superflow® high capacity 50 % suspension 4 ml;
20 ml;
50 ml;
2-4030-002;
2-4030-010;
2-4030-025;
Strep-Tactin® XT Superflow® high capacity gravity flow columns 5×0.2 ml;
1 ml;
5 ml;
10 ml;
2-4031-005;
2-4032-001;
2-4033-001;
2-4034-001;
Strep-Tactin® XT Superflow® high capacity cartridges (for Äkta/peristaltic pumps) 1 ml;
5 ml;
2-4025-001;
2-4026-001;
MagStrep "type3" XT beads 5% suspension 2 ml; 2-4090-002;
Strep-Tactin® XT Spin Column Kit 1 kit; 2-4151-000;
Strep-Tactin® XT immobilization plate 1 plate; 2-4101-001;
Twin-Strep-tag® Capture Kit 1 kit; 2-4370-000;

下载百购生物网App

使用百购生物网App,随身查看活动报名情况

立即下载稍后再说