欢迎访问百购生物网!

百购生物网

直接流式细胞仪协议

时间 :2018-12-20 来源:百购生物网

洗涤细胞并将细胞悬浮液在冰冷的PBS,10%FCS,1%叠氮化钠中调节至1-5×10 6个细胞/ mL 的浓度。细胞通常在聚苯乙烯圆底12×75mm 2 Falcon管中染色。但是,它们可以在任何有适当离心机的容器中染色,例如试管,eppendorf管和96孔圆底微量滴定板。通常,应该将细胞充分离心,以便可以在几乎没有细胞损失的情况下除去上清液,但不能太难以使细胞难以重悬。
 
我们建议用冰冷的试剂/溶液染色,并在4°C下染色,因为低温和叠氮化钠的存在会阻止表面抗原的调节和内化。内化可导致荧光强度的损失。
 
加入0.1-10μg/ mL的缀合的一抗。如有必要,稀释液应在3%BSA / PBS中进行(此时也可加入碘化丙啶以排除死细胞)。
在室温或4°C下在黑暗中孵育至少30分钟。此步骤需要优化。
通过以400g离心5分钟洗涤细胞3次,并将它们重悬于500μL至1mL冰冷的PBS,10%FCS,1%叠氮化钠中。将细胞置于冰上或4°C的冰箱中,直到您预定的分析时间。
为获得最佳结果,请尽快分析流式细胞仪上的细胞。