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抗体稀释和滴度

时间 :2018-12-27 来源:百购生物网

抗体稀释指南,包括优化抗体浓度和建议稀释的技术。 
使用哪种稀释液
抗体和抗原亲和常数之间的结合速率可受温度,pH和缓冲液成分的影响。改变抗体和抗原溶液的相对浓度也可以控制抗体 - 抗原复合物形成的程度。由于通常不可能改变抗原的浓度,因此每种抗体的最佳工作浓度必须用每种应用和一组实验条件的稀释液确定。
我们的许多抗体都推荐用于数据表中包含的各种应用的稀释液。但是,它们可能需要一些优化。
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优化抗体稀释:滴定实验
对于每个测定,必须通过实验确定最佳抗体浓度,其以最小背景给出最佳染色,并且通常通过在滴定实验中使用一系列稀释来确定。例如,如果产品数据表建议使用1:200稀释液,建议稀释度为1:50,1:100,1:200,1:400和1:500。
通过首先选择固定的孵育时间然后选择一系列抗体的实验稀释液来进行滴定实验。每种稀释液应在相同类型的样品上进行测试,以保持相同的实验条件。
许多抗体具有相似的批次间一致性,因此在大多数情况下只需要一次滴定实验。然而,特别是对于多克隆抗体,当同一抗体批次之间的染色结果发生变化时,我们建议进行另一次滴定实验。
建议稀释的抗体,数据表中没有建议稀释
未纯化的抗体制剂在抗体浓度方面显着不同。如果给定的未纯化抗体制剂的特异性抗体浓度未知,我们建议使用浓度/纯化试剂盒,并参考下表作为指导。
该表提供了各种稀释度,可用于来自不同抗体来源的每种应用:
组织培养上清液 腹水 整个抗血清 纯化抗体
WB /斑点印迹 1/100 1/1000 1/500 1μg/ mL
IHC / ICC 整洁-1/10 1/100 1 / 50-1 / 100 5μg/ mL
EIA / ELISA 1/1000 1/10000 1/500 0.1μg/ mL
FACS /流式细胞术 1/100 1/1000 1/500 1μg/ mL
IP - 1/100 1 / 50-1 / 100 1-10μg/ mL
近似IgG浓度估计值 1-3毫克/毫升 5-10毫克/毫升 1-10毫克/毫升 -