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抗体和抗体纯化的格式

时间 :2018-12-29 来源:百购生物网

离心和过滤是用于血清,腹水和组织培养上清液的样品澄清的标准实验室技术。这些技术可去除可阻断色谱柱的脂质和颗粒物质。
 
对于某些材料,也可能需要缓冲液交换和脱盐。硫酸铵沉淀是通常与腹水一起使用以浓缩免疫球蛋白的进一步制备步骤。
 
抗血清
多克隆抗体通常以相对未纯化的形式获得,描述为“血清”或“抗血清”。抗血清是指来自免疫宿主的血液,已从中除去凝血蛋白和红细胞。抗血清将含有所有类别的抗体/免疫球蛋白以及其他血清蛋白。
 
除了识别靶抗原的抗体之外,抗血清还含有针对各种非靶抗原的抗体,其有时在免疫测定中非特异性地反应。出于这个原因,通常纯化原始抗血清,以消除血清蛋白并富集与靶抗原特异性反应的免疫球蛋白部分。
 
组织培养上清液
单克隆抗体可以作为杂交瘤细胞培养物(分泌细胞因子的细胞)生长,并作为杂交瘤组织培养上清液收获。有关如何生产杂交瘤的更多详细信息,请参阅单克隆抗体生产部分。
 
腹水液
可以通过在小鼠(或大鼠)的腹膜腔内生长杂交瘤细胞来产生单克隆抗体。当注射到小鼠中时,杂交瘤细胞繁殖并在其腹部产生液体(腹水)。该液体含有可以收获的高浓度抗体。这通常比杂交瘤细胞培养物提供更高的抗体产量。
 
未经纯化的抗体浓度
未纯化的抗体制剂在特定抗体浓度方面显着不同。如果给定的未纯化抗体制剂的特异性抗体浓度未知,可以参考以下“典型范围”作为估计的指导:
 
 
组织培养上清液 腹水 整个抗血清 纯化抗体
WB /斑点印迹 1/100 1/1000 1/500 1μg/ ml
IHC / ICC 整齐-10分之1 1/100 1 / 50-1 / 100 5μg/ ml
EIA / ELISA 1/1000 1/10000 1/500 0.1μg/ ml
FACS /流式细胞术 1/100 1/1000 1/500 1μg/ ml
IP 的1 / 10-1 / 50 1/100 1 / 50-1 / 100 1-10μg/ ml
浓度估算 1-3毫克/毫升 5-10毫克/毫升 1-10毫克/毫升
 
纯化抗体
多克隆抗血清或单克隆腹水液/组织培养上清液通常通过以下两种方法之一纯化:
 
蛋白质A / G纯化
 
蛋白质A / G纯化使用金黄色葡萄球菌  蛋白A或链球菌蛋白G对免疫球蛋白Fc结构域的高亲和力。蛋白质A / G纯化从原始抗血清中消除了大部分血清蛋白质。然而,它不能消除非特异性免疫球蛋白部分。结果,蛋白质A / G纯化的抗血清可能仍然具有少量不希望的交叉反应性。
 
亲和纯化
 
亲和纯化分离具有相似特征的特定蛋白质或蛋白质组。该技术基于蛋白质与偶联于色谱基质的特定配体之间的可逆相互作用来分离蛋白质。
 
抗原亲和纯化利用特异性免疫球蛋白部分对其产生的免疫抗原的亲和力。抗原亲和纯化导致消除大部分非特异性免疫球蛋白部分,同时富集与靶抗原特异性反应的免疫球蛋白部分。得到的亲和纯化的免疫球蛋白将主要具有所需特异性的免疫球蛋白。 
 
抗体纯化产品列表来自Abcam。
 
预吸附
多克隆抗体有时被预先吸附。这意味着它们已经被其他蛋白质或来自各种物种的血清等吸附,以消除任何可能交叉反应的抗体。得到的纯化抗体应该非常纯净和特异,并且应该显着降低任何交叉反应性。