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流式细胞术的两种滤光器的性质的说明

时间 :2019-01-17 来源:百购生物网

聚焦激光束
光束必须聚焦在样品流上。这可以通过简单的透镜实现,该透镜提供通常约50μm的光束横截面。一些仪器使用椭圆形透镜来产生20 x60μm的椭圆光束。另一种配置是交叉的圆柱形透镜对,它可以从1毫米直径的激光束产生一个典型的5×120微米的椭圆光斑(图2.9)。可以通过选择合适的一对透镜来指定所需的激光束轮廓。
 
 
 
交叉柱面透镜对用于聚焦。
 
球形或近球形光束与空气流系统一起使用,其中光束的直径必须小于光流的直径,以便最小化来自流 - 空气界面的过量光散射。该系统中电池的较高速度可在宽激光束下提供可接受的快速信号脉冲(2-7μs)。整个细胞在通过光束时被照亮,并且由于存在遮蔽条(用于阻挡从流/空气界面反射的大部分光)而导致的荧光损失通过更有效的激发部分地得到补偿。细胞
 
宽的扁平梁用于基于石英室的流动室,其更有效的收集光学器件补偿电池的较低水平的照射。较小的光束高度还可以从更缓慢移动的细胞中提供快速电子脉冲(~5μs)。
 
椭圆形光束具有以下优点:当电池穿过光束时,电池被更均匀地照射关于细胞形状的一些信息也可以得出,可用于DNA分析。
 
 
。 光束形状对轴上看到的光的激光束强度的影响与离轴单元相反。对于更平坦的光束,光束中光束的精确定位不太重要。
 
2.4.4落射照明
在基于荧光显微镜的仪器中,激发光束(通常来自弧光灯)和发射的荧光通过相同的透镜(发光)收集。
 
2.4.5光线收集
收集透镜应具有尽可能高的数值孔径,以便尽可能多地收集荧光。在分析仪中,使用比色皿流通池而不是细胞分选器,可以使用较短的工作距离,包括浸没物镜,从而获得更高的数值孔径。
 
在使用空气流系统的细胞分选器中,镜片的工作距离明显受限。在使用石英比色皿的细胞分选仪中,振动流动池的需要  排除了浸没物镜的使用。然而,在这种情况下,可以通过将小透镜粘合到流动池的侧面来改善光收集。
 
2.4.6光学滤波器
激光器发出单一波长的光,而弧光灯则发出宽光谱。因此,弧光灯需要光学滤波器来选择正确的激发波长。这些通常由彩色玻璃制成。激光不需要进一步过滤。输出侧使用的二向色和带通滤波器通常是干涉滤波器。
 
带通滤波器在窄带上传输光,通常立即用在探测器前面。它们的重要参数是透射的峰值波长,在峰值波长处透射的光的百分比及其带宽(以50%透射点的间隔测量)
 
二向色滤光片(有时称为分束器)在流式细胞仪中以45°的角度使用。短波长通过(SWP)滤光器透射低于给定波长的光并反射更长波长的光。长波通过(LWP)滤波器以相反的方式工作。它们的重要参数是50%透射的波长(LWP的截止或SWP的截止波长),峰值透射和截止或截止波长处的斜率。它们的特性取决于它们的使用角度。