欢迎访问百购生物网!

百购生物网

通过带电液滴的偏转进行分类

时间 :2019-01-22 来源:百购生物网

使用导电鞘液(缓冲盐水)。流动室通过压电传感器垂直振动,频率通常在20和60kHz之间。该振动导致从出口喷嘴(通常直径75μm)流出的流体破碎成液滴。在感兴趣的细胞在当前形成的液滴内时,流动室以及因此的流动流被充电(±v,其中v通常在50和150V之间)。液滴流通过一对带电板(±5000 V),使带电液滴与其中所含的细胞一起偏转和收集(图2.16)。因此,可以使用+ ve或-ve电荷对任何两个预定义门中的单元进行排序。
 
在通过激光束时,决定是否应对单元进行分类。为了确保流动室在正确的时刻充电,必须确定通过激光束的单元与液滴断开点之间的时间延迟,并将其送入计算机进行分类决定。任何影响折断点位置的因素(温度变化,气流,流通池孔中的污垢)都会对分拣机的稳定性产生不利影响。为每个分选的细胞偏转和收集多个液滴将最小化分选条件中的微小变化的影响。
 
偶尔在偏转的液滴中会有不止一个细胞。电子电路可以检测这些重合,如果需要高纯度(以略低的产量为代价),可以中止分类决定。
 
通过液滴偏转对细胞进行分选。
 
在理想条件下,细胞可以分选纯度为98%或更高。尽管纯度高,但与许多其他细胞分离方法相比,产率低。
 
假设流速为5000个细胞s -1,如果要分选的亚群的浓度为10%并且通过排除重合而允许一些损失,则收集的最大细胞数将为约2.10 6  h -1。
 
分选速率取决于群体中所需细胞的百分比,细胞的测量速率和液滴频率。“空气流”分拣机将具有更高的分选率,因为细胞具有更高的流速。通过使用窄腰激光束并在流动室内引入收缩,可以抵消比色杯系统中较慢的流速。
 
通过减小流动室孔的直径,可以降低液滴尺寸并因此增加液滴形成频率(以及“空气流”构型,流速)。孔口的最小尺寸由被分选的细胞的大小决定。通过增加样品压力也可以增加流速。
 
有专门为高速细胞分选设计的商业仪器(Dako Cytomation MoFlo,BD Aria)。它们可以达到最高70,000 cells s -1的最大流速。通过在充电脉冲上使用两个不同的电压,它们还可以对四个群体进行排序(每侧两个)
 
2.7.3机械分拣细胞
在一些分选器中,通过使用压电装置将电池偏转出主流来实现所需群体的分离。例如,在Partec PAS III机器中,压电流体阀在Y形流动通道的一个臂上操作,待收集的细胞在Y的一个臂上向下偏转。该分选器可用于分选大颗粒,例如原生质体,因为它避免了在静电分选器中需要精确形成液滴所带来的尺寸限制。
 
压电式电池分选机的优点是,一旦安装好,它们就非常稳定。它们不需要校准或调整 - 只需打开即可。它们有缺点。因为它们是机械操作的,所以它们仅限于分选最多300个细胞s -1  并且收集容器接收恒定的鞘液流,稀释分选的细胞。只能对一组细胞进行分类。